Postgrado en Técnicas Cromatográficas Avanzadas: GC, GC-MS, HPLC

INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRAFÍA

Introducción histórica y conceptos generales

Parámetros cromatográficos

Teoría de la separación cromatográfica

Técnicas cromatográficas:

Cromatografía Plana o Cromatografía en capa fina (CCF o TLC)

Cromatografía de gases (CG)

Cromatografía Líquida de alta resolución (HPLC)

Tipos de cromatografías

CROMATOGRAFÍA PLANA

Principios fundamentales de la cromatografía plana

Principales aplicaciones (o campos de aplicación)
Desarrollo de métodos de separación
Técnicas avanzadas en cromatografía plana

Cromatografía en capa fina de alta resolución (HPTLC)
Troubleshooting
Aplicación de la técnica según Farmacopea Europea

Prácticas:

Desarrollo de métodos de separación

Estudio de la separación de isómeros posicionales

Estudio del Límite de Detección de compuestos en CCF

Estudio de preparación y uso de reveladores para CCF

Desarrollo de métodos para separación de Principios Activos Farmacéuticos

CCF bidimensional aplicada a productos naturales y muestras complejas en general

CCF preparativa

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Principios fundamentales de la cromatografía en columna.

Similitudes y diferencias respecto de la cromatografía plana.

Principales aplicaciones.

Desarrollo de métodos de separación.

Desarrollo de métodos de monitorización.

Prácticas:

Búsqueda de condiciones para la separación en columna

Columna por gravedad: separación de una vitamina y un conservante

Separación de Productos activos farmacéuticos por cromatografía por gravedad

Separación de productos de síntesis estructuralmente relacionados por cromatografía flash

Separación de isómeros posicionales por cromatografía flash

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)

Instrumentación

Sistema de bombeo

Inyector

Horno de columna

Columnas y fase estacionaria

Fase móvil

Detector

Cualificación del sistema cromatográfico de HPLC

Cualificación del diseño (DQ)

Adquisición y tratamiento de datos

Tratamiento de la información

Tratamiento de la señal cromatográfica: integración

Análisis cualitativo

Análisis cuantitativo

Métodos de cuantificación relativos

Métodos de cuantificación absolutos

Desarrollo de métodos de análisis en HPLC

Objetivos de la separación

Pretratamiento de muestra

Selección método de detección

Selección método cromatográfico

Ensayos previos

Optimización de la separación cromatográfica

Métodos de cuantificación relativos

Cálculos

Estimación de fiabilidad de los resultados

Desarrollo de métodos de HPLC en fase reversa

Troubleshooting

Cromatografía Líquida de Ultra Resolución o Ultra Presión (UPLC )

Fundamentos del UPLC:

Características generales de la técnica

Ecuación de Van Deemter

Capacidad de separación en gradiente

Aplicaciones del UPLC:

Características y ventajas

Optimización de métodos

Columnas de UPLC

Transferencia de métodos de HPLC a UPLC

Desarrollo de métodos en UPLC

Casos prácticos del trabajo real

Prácticas:

Desarrollo de métodos de análisis (simulación)

Cualificación operacional de un equipo de HPLC

Desarrollo de métodos para separación de compuestos aromáticos

Análisis cualitativo y cuantitativo de una familia de conservantes en crema

Determinación de Principio Activo Farmacéutico en un producto farmacéutico

Análisis de Principio Activo Farmacéutico según Farmacopea Europea: interpretación y aplicación de normativa.

Influencia del pH en el análisis cualitativo y cuantitativo de conservantes en alimentos

Influencia del gradiente de fase móvil en la determinación de antioxidantes

Análisis cualitativo y cuantitativo de alcaloides en alimentos

Validación de método de determinación de Principio Activo Farmacéutico en un producto farmacéutico.

Determinación mediante HPLC de compuestos sin grupos cromóforos

CROMATOGRAFÍA DE GASES

Principios generales de la cromatografía de gases

Instrumentación

Inyector

Horno de columna

Columnas

Detector

Gases para GC

Control de la temperatura

Cualificación del sistema cromatográfico de GC

Cualificación del diseño (DQ)

Cualificación de la instalación (IQ)

Cualificación de la operación (OQ)

Cualificación del funcionamiento (PQ)

Tratamiento de datos

Cualificación del diseño (DQ)

Análisis cualitativo

Identificación

Cálculo del índice de Kovats

Metodología

Análisis cuantitativo

Métodos de cuantificación relativos

Métodos de cuantificación absolutos

Tratamiento de datos

Preparación de muestras para análisis por GC

Extracción

Purificación

Derivatización

Desarrollo de métodos de análisis en GC

Objetivos de la separación

Concentración de analito

Muestreo y pretratamiento de muestra

Selección temperatura y modo de inyección

Selección gas portador

Selección columna y fase estacionaria

Selección temperaturas del horno

Troubleshooting

Aplicaciones de la Cromatografía de gases

Ejemplos

Prácticas:

Desarrollo de métodos de análisis (simulación)

Módulos y componentes del cromatógrafo de gases

Desarrollo de método de análisis cualitativo para una mezcla de hidrocarburos aromáticos

Análisis cuantitativo de un precursor de PVC por el método de patrón interno

Optimización de parámetros de inyección: modo split/splitless y tiempo de splitless

Optimización de parámetros de inyección: análisis por headspace de componentes de una bebida alcohólica

Adaptación de método de Farmacopea Europea para análisis cuantitativo por adición estándar de diferentes glicoles en un excipiente farmacéutico.

Comprobación de parámetros cualitativos de la columna de cromatografía de gases.

Análisis de alcoholes por adición estándar en comprimidos de un fármaco

Cualificación operacional de un equipo de GC

Desarrollo de método de determinación cuantitativa de un ingrediente en bebida carbonatada

Validación de método de determinación cuantitativa de un ingrediente en bebida carbonatada

Desarrollo de un método cuantitativo para la determinación de hidrocarburos aromático

policíclicos (PHAs) en aguas extrayendo los contaminantes con Solid Phase icroextraction (SPE)

VALIDACIÓN DE MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

Definición

Consideraciones básicas

Conceptos básicos

Normativa: ICH, USP EP, etc.

Parámetros de validación y criterios de aceptación

Especificidad

Linealidad

Precisión

Exactitud

Rango

Límite de detección

Límite de cuantificación

Robustez

Idoneidad del sistema

Revalidación al modificar métodos previamente validados: criterios de las farmacopeas

Ejemplos

ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Principios básicos de la espectrometría de masas

Cronología

Ventajas

Usos

Información del espectro

MS como detector

Aplicaciones

Instrumentación

Sistema de entrada de muestra

Fuente de ionización

Analizador de masas

Detector

Sistema de vacío

Parámetros fundamentales en espectrometría de masas

Poder de resolución

Rango de masa

Sensibilidad

Velocidad de barrido

Selectividad

Relación entre parámetros

Modos de adquisición en espectrometría de masas

SCAN

SIM

TIC

BPC

Fragmentogramas

Análisis cuantitativo en espectrometría de masas y aplicaciones

Parámetros que influyen en la cuantificación

Métodos de cuantificación

Validación

Análisis cualitativo en espectrometría de masas y aplicaciones

Identificación de compuestos

Interpretación de espectros de masas

Prácticas:

Familiarización del trabajo con librería de espectros de masas

Identificación de componentes en una mezcla compleja de alcoholes

Extracción sohxlet de alimentos e identificación de esteroles presentes

Desarrollo de métodos de cuantificación de trazas por Single Ion Monitoring (SIM)

Obtención de un aceite esencial y caracterización por GC-MS

Determinación de aromas y componentes característicos en alimentos

Desarrollo de método para identificación de impurezas en Ingredientes Activos

Farmacéuticos.

Determinación cuantitativa de aromas en bebidas aplicando Solid Phase

Microextraction (SPE)

Conferencias y Seminarios

Impartidas por especialistas de la industria y de centros de investigación. Suelen realizarse 3 o 4 por curso.