Principios de Biología Molecular

Tema 1: Definiciones.
Estructura y expresión de un gen eucariota codificante para un MRNA y una proteína.
Parámetros para la descripción de un gen.
Secuenciación de genomas enteros.

Tema 2: Vectores y Clonación.
Enzimas de restricción.
Electroforesis de ácidos nucleicos.
Descripción de un plásmido y un fagémido.
Descripción de un bacteriófago y un cósmido.
Descripción de un YAC y otros vectores de gran capacidad.
Clonación molecular.
Transformación genética de bacterias y levaduras.

Tema 3: Marcaje de ácidos nucleicos e hibridaciones.
Marcaje del DNA.
Hibridación molecular.
Hibridación in situ de MRNA.

Tema 4: Genoteca de DNA y cribado.
Construcción de una genoteca de DNA genómico.
Construcción de una genoteca de CDNA.
Cribado de una genoteca.
Cribado diferencial: genotecas sustraídas, AFLP-CADN.
Cribado diferencial por DD RT-PCR: selección de MRNA (differential display RT-PCR).
Cribado diferencial por SSH: hibridación sustractiva y supresora (suppression substractive hybridization).
Cribado diferencial por RDA: análisis de la diferencia de abundancia (representational difference analysis).
EST: marcas de gene expresados (expressed sequence TAGS) matrices de DNA: chips de DNA, filtros de CDNA.

Tema 5: Caracterización de un gen.
Secuenciación de DNA.
PCR (polymerase chain reaction). Race: amplificación rápida de extremos de CDNA (rapid amplification of cdna ends).
Marcha genómica por PCR.
RT-PCR: PCR sobre RNA (reverse transcriptase PCR).
Transcripción in Vitro.
Determinación del sitio de iniciación de la transcripción.
Análisis funcional de promotores.
Geles de retardo.
Footprinting con DNASA.

Tema 6: Transformaciones genéticas de eucariotas.
Transformación genética vegetal con agrobacterium tumefaciens.
Transferencia directa de genes a protoplastos vegetales.
Transferencia directa de genes por biolística.
Transformación genética de células animales.
La clonación de animales.
Expresión transitoria.

Tema 7: Análisis de la función de un gen.
Proteínas recombinantes.
Los baculovirus de insectos, vectores de expresión de transgenes.
Método del doble híbrido.
Mutagénesis dirigida.
Complementación en levadura.
Inactivación de genes en levadura (knock-out).
Marcado molecular (gene tagging).
RNA, inactivación de genes por interferencia de RNA (RNA interference).

Tema 8: Polimorfismo de un genoma.
Marcadores genéticos moleculares.
Mapas genéticos y físicos.
PFGE: electroforesis en campo pulsante (pulse field gel electrophoresis).
RFLP: polimorfismo de tamaño de fragmentos de restricción(restriction fragment length polymorphism).
RADP: polimorfismo de dna por amplificación aleatoria (random amplified polymorphic dna).
AFLP: polimorfismo de tamaño de fragmentos amplificados (amplified fragment length polymorphism).
Los retromarcadores.
SSCP: polimorfismos de conformación de dna monocatenario (single strand conformation polymorphism).
DGGE: electroforesis de dna en geles desnaturalizantes de gradiente (denaturating gel gradient electrophoresis).
SNP: polimorfismo de un solo nucleótido (single nucleotide polimorphism).
SSR: microsatélites, repetición de secuencias simples (simple sequence repeats).
- Bibliografía.