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- Estructura del DNA. Aspectos básicos de la Biología Molecular. Desarrollo. Técnica de PCR. Optimización de la técnica de PCR. Aplicaciones de la Técnica de PCR.ica de PCR
Bibliografia
INTRODUCCIÓN
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- Estructura del DNA. Aspectos básicos de la Biología Molecular. Desarrollo. Técnica de PCR. Optimización de la técnica de PCR. Aplicaciones de la Técnica de PCR.ica de PCR
Bibliografia
INTRODUCCIÓN
Para abordar de lleno el tema de la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) debemos hablar primero de Biología Molecular, esta es una ciencia cuyo objetivo fundamental es la comprensión de todos aquellos procesos celulares que contribuyen a que la información genética se transmita eficientemente de uno seres a otros y se exprese en los nuevos individuos, este conocimiento nos permite cruzar las barreras naturales que existen entre las especies y "colocar" genes de un organismo otro llamado hospedero, empleando técnicas de ingeniería genética. Gracias a este avance, se pueden producir fragmentos de ácidos nucleicos a gran escala, abriendo así las puertas a la secuenciación de los ácidos nucleicos y por ende a nuevas disciplinas como el diagnóstico molecular, la terapia génica o la obtención de organismos superiores recombinantes...
Estructura primaria del DNA
La estructura primaria viene dada por la secuencia de nucleótidos. Cuando se quiere representar la secuencia de un oligonucleótido o de un ácido nucleico, se representa mediante la terminología de cada una de las bases...
Aspectos básicos de la Biología Molecular
La aparición de una serie de técnicas englobadas dentro del término genérico de Ingeniería genética y referidas indistintamente como clonación, DNA recombinante o manipulación génica han sido la causa de pocas áreas de la biología molecular permanezcan inalteradas. Antes del desarrollo de la ingeniería genética no era posible aislar un gen concreto eucariótico en cantidades suficientes para su estudio molecular o el de su producto...
DESARROLLO DE LA TÉCNICA DE REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA
En los años setenta se desarrollaron los métodos que permitieron de manera simple y relativamente rápida para determinar la secuencia nucleotídica de cualquier fragmento de DNA. Estos primeros intentos de secuenciar los ácidos nucleicos siguieron los pasos empleados en la secuenciación de proteínas: romper las moléculas en pequeños fragmentos, determinar su composición de bases y deducir la secuencia a partir de fragmentos solapantes. Este método resulta mas o menos sencillo para proteínas que resultan de la combinación de hasta veinte aminoácidos distintos, pero constituye un problema en el caso de los ácidos nucleicos donde la secuencia resulta de la combinación de únicamente cuatro nucleótidos diferentes.
Componentes y optimización de la reacción de amplificación:
Muestra de ADN
Existen una serie de reglas sencillas para que el DNA molde no sea un problema en la reacción...
Aplicaciones de la secuenciación de ADN
Detección de mutaciones: La técnica de PCR nos permite localizar mutaciones previamente descritas. Se emplea así en la secuenciación de ADN como un método de diagnóstico: Una vez que se ha caracterizado la relación con una enfermedad de una determinada mutación puntual (mutaciones en el gen de la galactosa 1P uridiltransferasa en la galactosemia, mutaciones en c-Ras y cáncer, etc.) o de una pequeña deleción (deleción de tres bases en el gen CFTR de fibrosis quística ) puede desarrollarse un método de detección rutinario , la secuenciación automática puede implementarse como método de screening para la localización de nuevas mutaciones...
